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豬肉中氯霉素的測(cè)定

更新時(shí)間:2023-01-05 點(diǎn)擊次數(shù):1056

氯霉素(chloramphenicol,CAP)是一種廣譜性抗生素,是某些微生物,如(Streptomyces venezuelae)的次生代謝產(chǎn)物,能有效地抗革蘭氏陽(yáng)性、革蘭氏陰性、里克次氏體、支原體、衣原體等微生物。自1950年以來(lái),氯霉素因方便適用,價(jià)格便宜,而作為獸藥被廣泛的使用。氯霉素因被發(fā)現(xiàn)對(duì)人體骨髓造血機(jī)能有抑制作用,可引起人的粒細(xì)胞缺乏病,再生障礙性貧血和溶血性貧血,甚至可導(dǎo)致食用者死亡。

目前,檢測(cè)氯霉素的方法大致可分為篩選方法確證方法。

常用的篩選方法有微生物學(xué)方法、放射免疫法和酶聯(lián)免疫法。微生物法靈敏度低、反應(yīng)選擇性差;放射免疫法存在同位素半衰期短、放射性污染等不足;酶聯(lián)免疫法作為目前檢測(cè)氯霉素的主要方法,又有假陽(yáng)性高、不能確證的缺點(diǎn)。

確證方法中氣質(zhì)聯(lián)用法需要對(duì)氯霉素分子中的兩個(gè)羥基進(jìn)行衍生化以提高其揮發(fā)性,實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),步驟繁瑣。LC-MS法具有定性、定量準(zhǔn)確,檢測(cè)限低,無(wú)需衍生化等優(yōu)點(diǎn)。




參考標(biāo)準(zhǔn)

GB 31658.2-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中氯霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法



提取步驟

稱取樣品 5.00g于50mL離心管中,加入4%氯化鈉溶液5mL,乙腈5mL,渦旋2min,8000 r/min,離心5min,取上清液,殘?jiān)貜?fù)提取1次,合并上清液。加入正己烷5mL,渦旋振蕩1min,4000r/min,離心5min,棄去上層液,正己烷重復(fù)處理1次。加水飽和的乙酸乙酯溶液5mL ,渦旋60s,4000r/min,離心5min,上層液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中,重復(fù)提取1次,合并提取液,45℃氮?dú)獯蹈?,加?乙腈(95:5)3mL,溶解,備用。

取固相萃取柱Welchrom® C18E 500mg 3mL,依次用甲醇、水各10mL預(yù)洗;

取備用液過(guò)柱;

加水洗柱2次,每次3mL;

加入4mL甲醇水(50:50)洗脫,過(guò)柱流速為1滴/s;

加水飽和乙酸乙酯溶液4mL,渦旋1min,4000r/min,離心5min,取上層液,重復(fù)處理1次,合并上層液,氮?dú)獯蹈伞A鲃?dòng)相1mL溶解,混勻,過(guò)0.22μm濾膜,上機(jī)。

注:由于填料較厚,導(dǎo)致無(wú)法自然滴落,需要使用真空泵,保持1滴/s流速。



色譜條件

色譜柱:月旭Boltimate® LP-C18 Core Shell (2.1×150mm,2.7μm)。

流動(dòng)相:甲醇:水=50:50;

柱溫:30℃;

流速:0.3 mL/min;

進(jìn)樣量:5μL。



質(zhì)譜條件

離子源:ESI;

檢測(cè)方式:MRM;

干燥氣:氮?dú)猓?50℃,流速:1000L/Hr;

碰撞氣:氬氣;

離子噴霧電壓:1.5kV。


微信截圖_20230105100018.png




譜圖數(shù)據(jù)


微信截圖_20230105100102.png




結(jié)論


使用Welchrom® C18E 500mg 3mL SPE凈化后,回收率滿足要求。

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