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色譜法中常用定量方法分享

更新時(shí)間:2022-09-07 點(diǎn)擊次數(shù):1948

眾suo周知,色譜法能解決那些物理常數(shù)相近,化學(xué)性質(zhì)類似的同系物、異構(gòu)體等復(fù)雜多組分混合物的分離分析問題,既能鑒定化合物又能做定量測(cè)定。色譜法是根據(jù)色譜峰的面積或高度進(jìn)行定量分析的。色譜定量計(jì)算方法很多,目前比較廣泛應(yīng)用的有歸一化法、內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法三種。今天就由小編給大家簡(jiǎn)單分享一下色譜法中常用的幾種定量方法。


歸一化法

由于組分的量與其峰面積成正比,如果樣品中所有組分都能產(chǎn)生信號(hào),得到相應(yīng)的色譜峰,那么可以用如下歸一化公式計(jì)算各組分的含量。

微信截圖_20220907090544.png

式中:C表示含量

         F表示校正因子

         A表示峰面積

若樣品中各組分的校正因子相近,可將校正因子消去,直接用峰面積歸一化進(jìn)行計(jì)算。中國(guó)藥典用不加校正因子的面積歸一化法測(cè)定藥物中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度。

微信截圖_20220907090552.png

優(yōu)點(diǎn):

1.簡(jiǎn)單、快速的定量過程;

2.進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格。

缺點(diǎn):

1.所有組分峰都要流出;

2.需測(cè)量所有的組分;

3.必須校正所有的峰。

內(nèi)標(biāo)法

選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對(duì)照物質(zhì)加入待測(cè)樣品溶液中,以待測(cè)組分和對(duì)照物質(zhì)的響應(yīng)信號(hào)對(duì)比,測(cè)定待測(cè)組分含量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法?!皟?nèi)標(biāo)"的由來是因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)(對(duì)照)物質(zhì)加入到樣品中,有別于外標(biāo)法。該對(duì)照物質(zhì)稱為內(nèi)標(biāo)物。

在一個(gè)分析周期內(nèi)不是所有組分都能流出色譜柱(如有難氣化組分),或檢測(cè)器不能對(duì)每個(gè)組分都產(chǎn)生信號(hào),或只需測(cè)定混合物中某幾個(gè)組分的含量時(shí),可采用內(nèi)標(biāo)法。

準(zhǔn)確稱量W克樣品,再準(zhǔn)確稱量Ws克內(nèi)標(biāo)物,加入至樣品中,混勻,進(jìn)樣。測(cè)量待測(cè)組分i的峰面積Ai及內(nèi)標(biāo)物的峰面積As,則i組分在W克樣品中所含的重量Wi,與內(nèi)標(biāo)物的重量Ws,有下述關(guān)系:

微信截圖_20220907090557.png

待測(cè)組分i在樣品中的百分含量C%為:

微信截圖_20220907090602.png

對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求:

1.內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分,否則會(huì)使峰重疊而無法準(zhǔn)確測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物的峰面積;

2.內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間應(yīng)與待測(cè)組分相近,但彼此能*分離(R≥1.5);

3.內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。

優(yōu)點(diǎn):

1.在進(jìn)樣量不超限(色譜柱不超載)的范圍內(nèi),定量結(jié)果與進(jìn)樣量的重復(fù)性無關(guān)。

2.只要被測(cè)組分及內(nèi)標(biāo)物出峰,且分離度合乎要求,就可定量,與其他組分是否出峰無關(guān)。

3.很適用于測(cè)定藥物中微量有效成分或雜質(zhì)的含量。由于雜質(zhì)(或微量組分)與主要成分含量相差懸殊,無法用歸一化法測(cè)定含量,用內(nèi)標(biāo)法則很方便。

缺點(diǎn):加一個(gè)與雜質(zhì)量相當(dāng)?shù)膬?nèi)標(biāo)物。加大進(jìn)樣量突出雜質(zhì)峰,測(cè)定雜質(zhì)峰與內(nèi)標(biāo)峰面積之比,即可求出雜質(zhì)含量。但樣品配制比較麻煩和內(nèi)標(biāo)物不易找尋。

外標(biāo)法(校正曲線法 校正因子求算法)

外標(biāo)法是指按梯度添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)品(對(duì)照品)于空白溶劑中制成對(duì)照樣品,與未知試樣平行地進(jìn)行樣品處理并檢測(cè)。不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣,以峰面積為值繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而推算出未知試樣中被測(cè)組分濃度的定量方法外標(biāo)法在操作上可分為校正曲線法和校正因子求算法。

校正曲線法:取純物質(zhì)配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,利用色譜儀作出峰面積和濃度的關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線直接查出待測(cè)組分濃度。

校正因子求算法:是將標(biāo)樣多次分析后得到響應(yīng)信號(hào)與其含量求出它的絕對(duì)校正因子,再根據(jù)公式求出待測(cè)樣品中的含量。

微信截圖_20220907090608.png

式中:C表示含量

         F表示校正因子

         A表示峰面積

優(yōu)點(diǎn):操作和計(jì)算簡(jiǎn)便,無需所有峰都能被檢測(cè)到。

缺點(diǎn):進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確,儀器要求具有良好的穩(wěn)定性。



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