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液相色譜柱的平衡和填料的選擇

更新時間:2018-06-14 點擊次數(shù):1502
液相色譜柱的平衡
液相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗液相色譜柱。確保分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。
每天用足夠的時間以流動相來平衡液相色譜柱,就會在處理問題方面獲得大的"補償",而且液相色譜柱的壽命也會變得更長。
液相色譜柱操作步驟:
a.平衡開始時將流速緩慢地提高,用流動相平衡液相色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低,則需要較長的時間來平衡)
b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽,應(yīng)注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡;分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。
 
液相色譜柱填料的選擇
填料粒度
常用的填料顆粒度在3--10um之間,使用小粒徑填料柱效高,但柱壓也高,特別是使用含水量較大的甲醇流動相,由于水與甲醇之間形成氫鍵反應(yīng),粘度增大,柱壓是不可忽視的因素,柱壓高,很容易產(chǎn)生柱床層塌陷,降低柱子的使用壽命。如要追求高柱效,要用5um填料柱,推薦使用水一乙腈體系。
對于制備液相色譜柱,主要是追求制備量,而分離是次要的。一般選擇粒徑大于10um,廉價,且柱壓小。
對于UHPLC,填料粒徑較小,壓力也較HPLC高很多。
B、不同內(nèi)徑的液相色譜柱均是分析型的,對于常規(guī)分析很適用。其使用流速為1ml/min,一般儀器均能匹配。柱效高、性能穩(wěn)定、使用壽命較長。
C、液相色譜柱是半制備柱,分析條件可以移植分析柱的,普通液相色譜儀均可使用,可以得到少量純度很高的組分,用于組分的定性及一些研究工作,是一種很實用的工具。
D、液相色譜柱是制備型液相柱,可制備大量的純品組分,具有商業(yè)價值。目前,雖然價格較高,對于制藥行業(yè)來講,是必有的裝備之一。重現(xiàn)性好,柱校更高、分離效果更好、分離時間更短。

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