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磷酸鹽緩沖溶液配制方法及優(yōu)化案例

更新時間:2023-11-29 點擊次數(shù):1155

緩沖液的作用是在一定的范圍內(nèi)緩沖調(diào)整溶液的pH值,使待測溶液的酸度符合分析方法所規(guī)定的范圍。其中,磷酸鹽緩沖液截止波長低于200nm,在較低分析波長下仍可使用,具有三個pKa值,可提供1.1~3.1,6.2~8.2,11.3~13.3三個pH緩沖范圍,是HPLC在紫外檢測條件下zui常用的緩沖液之一。

配制磷酸鹽緩沖液時,通常所說的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度,而非Na+K+的濃度,Na+K+的作用是調(diào)節(jié)滲透壓。


image.png

各種濃度PB(pH=7.4)的配制:

先配0.2M PBpH=7.4,100mL):取0.2 mol/LNa2HPO4母液81mL0.2mol/LNaH2PO4母液19mL,混勻。然后只需將0.2M PBpH=7.4)按相應(yīng)比例

適當稀釋即可,如:

0.1M PBpH=7.4):取500mL 0.2M PB,加水稀釋至1L。

0.01M PBpH=7.4):取50mL 0.2M PB,加水稀釋至1L

0.02M PBpH=7.4):取100mL 0.2M PB,加水稀釋至1L。

image.png

以上配制方法可供參考。日常配制流動相時常使用緩沖鹽搭配酸/堿溶液進行pH調(diào)節(jié)。

在使用酸/堿溶液調(diào)節(jié)緩沖溶液的pH時,使用低濃度(0.1mol/L)比使用高濃度(1mol/L)引起的誤差更小,對緩沖溶液pH的重復(fù)性和分析結(jié)果的重現(xiàn)性更有優(yōu)勢,尤其是針對一些對pH敏感的分析項目。


應(yīng)用案例:

客戶反饋參考應(yīng)用報告的液相條件,同一臺液相,不同天配制的流動相,配制方式一樣,分離重現(xiàn)性不好,有時能分開,有時會重合無法分離。了解到客戶稱取磷酸鹽后溶于1L超純水中后,再滴加1mol/L堿溶液進行pH調(diào)節(jié)。此方法容易造成配制差異,引起峰分離情況差異。


優(yōu)化流動相配制方法:

精密稱取Mg±0.001g磷酸鹽,溶于約800mL超純水中溶解。

預(yù)先配制0.1mol/L氫氧化鈉/氫氧化鉀溶液,稱樣量Ng±0.001g,用量筒準確量取100mL堿溶液備用。

將量取的堿溶液緩慢加入已溶解的磷酸鹽溶液中,觀察pH變化,達到目標pH后,停止加入堿溶液,記錄所需堿溶液體積。

再在緩沖鹽溶液中加入超純水定容至1L

后續(xù)配制只需量取固定體積的堿溶液加入固定稱樣量的緩沖溶液中,即可達到固定的pH。成功減小流動相配制差異,提高峰分離重現(xiàn)性。

效果見下圖:


image.png

結(jié)論:

流動相pH的穩(wěn)定性與準確性對樣品分析的影響較大時,需盡量規(guī)避流動相配制時的人員誤差,環(huán)境誤差,儀器誤差,物料稱量誤差等,以保證方法分析效果的重現(xiàn)性。




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