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關(guān)于制備液相分離的目標,必須要了解的小知識

更新時間:2023-03-07 點擊次數(shù):1089

想做制備液相,但無從下手,

拿到了小試結(jié)果,可不知道怎么放大,

制備結(jié)果不符合預(yù)期要求卻不知道原因,

這是為什么呢?

那么,我們一起來往下看吧……


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大家都知道,制備型(Prep)色譜是以分離、富集和純化為目的,以供進一步使用。

通常為了進行有效的制備型分離,需要了解如下信息:

1.組成

樣品大概有多少個組分;

分離的目標組分有哪些(一定要明確);

2.純度

目標組分的純度要求是多少;

對于制備型分離,對產(chǎn)品通常都有一定的純度要求,也就是說并不是所有的分離都要求產(chǎn)品純度達到100%,目標組分只要能達到我們具體的科研或是生產(chǎn)的純度要求就可以了。如微量的天然產(chǎn)物將其富集到大約70%的含量就可以進行初步鑒定;供核磁及紅外測試的樣品純度只要達到95%左右就可以達到要求;做定量分析用的標準品其含量至少要在99%以上;而一些生物活性物和一些生物活性物質(zhì)只需要除去其中的有害成分,并且它們的純度并不用含量來表示,而是用活力這個概念。只有了解產(chǎn)品純度的要求,我們才能在制備型分離中,建立起合適的方法。

3.復(fù)雜性

干擾物質(zhì)有哪些(盡可能了解,便于復(fù)雜樣品的前處理);

4.性質(zhì)

樣品的物理或化學性質(zhì)(化學結(jié)構(gòu)、溶解性、酸堿性、化合物的檢測方式);

目標組分的物理或化學性質(zhì)(同上);

對于目標組分,如果是未知化合物,則需要了解大致有哪些特征的官能團,如羥基、羧基、氨基、苯環(huán)、含氮雜環(huán)等,最終的目的都是了解化合物的極性大?。╨ogP值)和化合物的酸堿性(pKa值)。這兩個參數(shù)往往決定了在制備液相色譜方法開發(fā)中固定相和流動相的類型。

5.價值

原料是否易得、是否昂貴;

所分離的目標物價值又如何?

只有掌握了樣品的這些初步情況,才能使我們后面分離方法的建立有的放矢,選擇合適的固定相和流動相,挑選一只分析柱(如4.6mm*250的分析型柱子,使用10μm的制備級填料)進行方法摸索,并進行優(yōu)化。

優(yōu)化步驟可以簡單的歸納如下:

選擇最佳的高效液相色譜分離條件

在分析型的設(shè)備條件下

摸索制備型分離方法

放大到制備型的規(guī)模上

進行制備型分離

收集餾分

在分析型的液相色譜儀器上

檢測產(chǎn)品純度,

如果不符合要求,重新在分析型

液相色譜儀器上改進分離條件

合并相同組分

如果有需要的話,

可以再進一步提純產(chǎn)品

收集目標物

看到這,有的小伙伴可能有疑問了,為什么不直接在制備柱上去摸索呢?因為直接在制備柱上摸索條件,規(guī)模變大,如果方法條件不合適,沒有獲得希望的純度,會造成樣品和試劑的多種浪費,時間長了還容易造成制備柱的損壞。需要注意的是,依據(jù)分析柱上摸索的方法,最好選擇與分析柱相同品牌的填料的制備柱,以免摸索好的方法在制備柱上無法重現(xiàn)。

下圖為幾款月旭科技用于小試和中試的WelPackerDAC動態(tài)軸向壓縮柱產(chǎn)品。


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不同內(nèi)徑的制備柱都有自己載樣量范圍。如果上樣量過小,則洗脫效率降低;如果上樣量過高,則樣品在柱內(nèi)過載,可能與雜質(zhì)無法得到有效分離即被直接洗脫流出。這里需要說明一點的是,由于大多數(shù)的制備型色譜都是在適量過載的情況下工作的,而在該條件下色譜柱的柱效是呈指數(shù)下降的,對于制備色譜柱過分追求小粒徑填料是得不償失的,如5μm粒徑填料的成本比10μm粒徑填料高好多。


制備色譜柱的使用壽命主要取決于柱子的質(zhì)量、樣品的性質(zhì)和干凈程度。對于高價值的DAC來講,延長柱子壽命是很重要的。一般來說,DAC需要配套制備型在線過濾器防止顆粒物堵塞制備柱。

下圖為幾款月旭科技常見的制備型在線過濾器。


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月旭科技提供專業(yè)的方法開發(fā),提供量身定制整體制備色譜解決方案,以滿足復(fù)雜的探索和業(yè)務(wù)需求,幫助您發(fā)現(xiàn)新方法來克服操作和數(shù)據(jù)挑戰(zhàn)。

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