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影響峰漂移的常規(guī)因素有哪些?

更新時(shí)間:2022-12-29 點(diǎn)擊次數(shù):2411

相信大部分實(shí)驗(yàn)室工作者在日常檢測(cè)中,或多或少都有遇到過(guò)讓大家比較頭痛的一個(gè)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)像就是:當(dāng)我們連續(xù)進(jìn)樣的時(shí)候,樣品的保留時(shí)間不能重現(xiàn),主要分為保留時(shí)間漂移和保留時(shí)間波動(dòng)。顧名思義前者是指保留時(shí)間僅沿單方向發(fā)生變化,而后者指保留時(shí)間無(wú)固定規(guī)律的波動(dòng)。一般在查找原因時(shí)將此兩種情況區(qū)分開(kāi)來(lái)排查,對(duì)找到問(wèn)題的原因往往很有幫助。

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導(dǎo)致樣品保留時(shí)間漂移和保留時(shí)間波動(dòng)

幾種最常見(jiàn)的原因

色譜柱平衡

如果我們觀察到保留時(shí)間漂移,首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相wan全平衡。通常平衡需要10-20個(gè)柱體積的流動(dòng)相,但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑(如離子對(duì)試劑)則需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱。

固定相穩(wěn)定性


固定相是否穩(wěn)定也是保留時(shí)間漂移原因之一,固定相的穩(wěn)定性都是有限的,即使在推薦的PH范圍內(nèi)使用,固定相也會(huì)慢慢水解。例如,硅膠基質(zhì)在pH4時(shí)水解穩(wěn)定性最好。水解速度與流動(dòng)相類(lèi)型和配體有關(guān)。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定;長(zhǎng)鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定;烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。

其他硅膠基質(zhì)鍵合相在高比例水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解,如氨基鍵合相等。

流動(dòng)相組成



流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等。流動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,從而造成保留時(shí)間的漂移。建議及時(shí)更換新的流動(dòng)相。

疏水坍塌


當(dāng)反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動(dòng)相時(shí),有時(shí)會(huì)發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或wan全不保留的現(xiàn)象,這就是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由流動(dòng)相不浸潤(rùn)固定相表面而致。當(dāng)色譜柱出現(xiàn)疏水坍塌也是保留時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。常規(guī)的C18柱已經(jīng)可以在95%左右的水相環(huán)境下正常使用而不發(fā)生疏水塌陷現(xiàn)象。純水中使用,則建議使用經(jīng)過(guò)修飾改性的專(zhuān)用耐水柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(例如月旭的Ultimate® AQ-C18)。

色譜柱污染

保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見(jiàn)原因是色譜柱污染。如方法已經(jīng)建立,在開(kāi)始時(shí)沒(méi)問(wèn)題,在使用一段時(shí)間后出現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題,可能是由于色譜柱污染引起的。這時(shí)需要對(duì)色譜柱加強(qiáng)沖洗,即使用比方法流動(dòng)相更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱。也可以在檢測(cè)樣品基質(zhì)比較臟時(shí)提前加保護(hù)柱。

其他因素

如果泵或者管路中有氣泡,保留時(shí)間會(huì)前后漂移,可通過(guò)排氣等將氣泡趕出。泵單向閥中的寶石球磨損,造成流動(dòng)相倒流,壓力不穩(wěn)定,保留時(shí)間會(huì)前后漂移。解決辦法是更換部件。泵比例閥控制失靈,不同流路流動(dòng)相比例不斷變化,保留時(shí)間會(huì)前后漂移。解決方法是更換部件。泵活塞桿密封墊老化,流動(dòng)相滲漏。解決辦法是換密封墊。在線混合器混合能力變差,不接梯度測(cè)試混合能力,并同手工配置流動(dòng)相比較。

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