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抽絲剝繭探案三:難以捉摸的保留時間漂移

更新時間:2022-08-23 點擊次數(shù):998


小伙伴們大家好,前面我們分別對鬼峰和肩峰離奇事件進行了分析,找出了根源。最近接到實驗室小姐姐bao案稱實驗過程保留時間有規(guī)律的漂移,小伙伴描述的著實詭異,跟本探長繼續(xù)來探案吧,揭開謎底。

先來看看備案筆錄:


User:老師,發(fā)現(xiàn)主峰每一針都向后移動半分鐘。

Engineer:只有保留時間移動?峰型和柱效有變化嗎?

User:沒有,用了一個星期,峰已經(jīng)從5分鐘漂到10分鐘了。

Engineer:手動混勻走單泵還是雙泵用的混合器走樣?

User:單泵……

案情陳述

客戶做某單糖衍生成鹽的物質(zhì)A,色譜條件:

色譜柱:氨基柱,4.6×250mm,5μm。

柱溫:35℃;

流動相A:乙腈,流動相B:硫酸緩沖溶液(取磷酸氫二鉀7.0g,用2000mL水溶解,加氨水0.5mL,用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.5);流動相比例:流動相A:流動相B=75:25;

流速:1.5mL/min;

紫外檢測波長:195nm;

進樣體積:20μL。

樣品由1:1乙腈水溶解制得。

案情細節(jié)披露

客戶小姐姐在實驗過程中發(fā)現(xiàn)在一個序列中保留時間有規(guī)律的后延,客戶講述峰形沒有太大變化,峰面積RSD也還好,換過不同的實驗人員多次重新配置了流動相,均存在這個問題,色譜圖如下:

微信截圖_20220823143234.png

漂移色譜圖

微信截圖_20220823143245.png

漂移重疊的色譜圖

這里要特別指出,用戶小姐姐用的色譜柱和色譜儀不是月旭品牌的,僅僅是基于用戶小姐姐對我們月旭工程師的信任,向我們的銷售工程師尋求指導幫助,我們都是做好事不留名的月旭人。

案情分析

我們先來羅列一些導致保留時間漂移的原因,再結(jié)合用戶的色譜圖來分析一下。

導致保留時間漂移的可能原因及解決辦法:

1、色譜柱原因:

1)柱子沒有達到平衡

解決辦法:延長平衡時間。

2)色譜柱污染或鍵合相流失

解決辦法:更換新柱。

2、儀器原因:

1)柱溫箱溫度變化

解決辦法:保持室溫恒定,柱溫設定正確且恒定。

2)儀器原因?qū)е碌牧鲃酉啾壤兓缁旌掀?,比例閥出現(xiàn)故障。

解決辦法:排查儀器流速恒定,檢查比例閥及混合器是否正常。

3、流動相配置原因

解決辦法:重新配置流動相,確保配置比例準確,對于易揮發(fā)的正相體系可使用安全瓶蓋防止揮發(fā);在使用緩沖鹽的體系保證緩沖鹽沒有沉淀或析出,pH恒定。 

4、系統(tǒng)漏液

解決辦法:排查系統(tǒng)的各接口處是否漏液,觀察壓力波動情況以及壓力線。如有漏液應重新連接管路擰緊。 

5、樣品自身原因,如樣品降解,保留時間發(fā)生變化

解決辦法:研究更利于樣品穩(wěn)定的流動相及溶劑體系。

根據(jù)用戶的情況給出建議

1、重配流動相

2、排查儀器

3、排查柱子

如此有規(guī)律的變化,考慮儀器的原因比較大。我們依據(jù)用戶的陳述來判斷一下

首先用戶說柱溫箱溫度設定沒問題而且溫度恒定,我們排除這個原因。

其次小姐姐說他們是等度而且是預混合之后才上機的,并且多人多次配置,這樣基本可以排除流動相的問題。

第三,針對色譜柱的問題客戶強調(diào)他們延長了平衡時間,而且分不同工作日跑了幾次序列均存在這個問題,故可以排除色譜柱的問題,最后只剩下儀器的問題了,由于用戶沒有時間慢慢排查,換了一臺儀器,保留時間漂移的問題沒有再出現(xiàn),至此謎底解開了。

Engineer: 老師您好,換了儀器之后,問題有改善嗎?

User: 昨天換了兩臺儀器,有一臺儀器跑出來的時間漂移不明顯,可以接受!

Engineer: 這根柱子比較特殊,現(xiàn)在漂移情況如何?

User: 嗯嗯,做了一天下來,漂移不到1分鐘。

Engineer: 太好了!

征求用戶同意我們編輯了本文,分享給更多的用戶小伙伴,當實驗過程中遇到保留時間漂移的情況時莫慌,我們可以逐一排查儀器、色譜柱、流動相、樣品等因素,色譜圖是以上各部分綜合作用產(chǎn)生的結(jié)果,我們只要耐心一一排查就可以找出問題所在。

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