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正相色譜,出峰漂移,月旭帶你一探究竟!

更新時間:2022-05-07 點擊次數(shù):1998

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正相色譜是我們色譜分離中一種常用的分離模式。其分離原理是基于固定相的極性大于流動相,通過吸附作用,實現(xiàn)不同極性物質(zhì)之間的分離。正相色譜的優(yōu)勢是可用于分離反相色譜不保留或極性較強(qiáng)的化合物,且適用于絕不溶于水的物質(zhì)分離。

但是正相色譜也有困擾我們的難題。經(jīng)常會有老師在使用正相色譜柱時出現(xiàn)出峰保留時間漂移的情況,有些是使用的正相柱子,樣品出峰不斷地有前移的趨勢,有些是新買的正相柱子分離樣品保留時間和原有的舊柱子不一致等。

這到底是怎么回事呢,出現(xiàn)這類保留時間漂移的問題又該如何解決呢?今天小旭就帶大家一探究竟。


首先我們簡單介紹下正相色譜

+

? 定義:

固定相的極性大于流動相,基于固液吸附的原理,分離不同極性的樣品。

? 洗脫順序:

極性低的物質(zhì)先被洗脫出來。流動相的極性越強(qiáng),洗脫能力也越強(qiáng)。

? 常見的正相色譜柱有:

硅膠柱,二醇基柱,氨基柱,氰基柱。

? 常用的流動相:

主要試劑:烷烴(戊烷,己烷,庚烷,辛烷),芳香烴(苯,甲苯,二甲苯),二氯甲烷,四氯化碳。

輔助試劑:甲基-t-丁基醚(MTBE),yi醚,四氫呋喃(THF),乙酸乙酯,乙腈,丙酮等。

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正相色譜的優(yōu)勢是可用于分離反相色譜中不保留或極性較強(qiáng)的化合物,且適用于絕不溶于水的物質(zhì)分離,還可用于拆分異構(gòu)體。但正相色譜中,卻易出現(xiàn)保留時間漂移的情況。這究竟是什么原因呢?

原來正相色譜柱的固定相,特別是硅膠柱中未改性的裸硅膠,其中的硅醇基的極性特別強(qiáng),其對流動相中甚至是實驗環(huán)境中的水分含量非常敏感。而由于正相色譜中固定相的水分含量常常是個影響選擇性的關(guān)鍵參數(shù),流動相中的水分含量通常影響保留時間和分離度。我們知道大部分溶劑都含有小部分的溶解水,比如正己烷在20℃下,其水分含量是0.0111%w/w。因此正相色譜中出現(xiàn)保留時間波動較大的問題,大多可歸因于固定相或流動相中水分含量的變化,而填料可能還是完好的。

那么正相色譜中,出現(xiàn)這種固定相或者流動相中的水分含量影響物質(zhì)保留時間的問題,該如何解決呢?

小旭給大家分享兩個解決方法:

1、去除固定相上的水分

用含2.5%二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個柱體積;

2、使用水分含量可控的流動相(比如:用水半飽和)

半飽和流動相配置方式:將無水的非極性流動相分成兩半;其中一半中加入一定量水,并混勻攪拌約一小時,靜置分層后,將多余的水相全部除去;將兩部分非極性流動相重新混合在一起就配成了“半飽和"流動相。

快來看一個案例吧~

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? 售后案例背景

客戶新買的Topsil®(拓譜)Silica硅膠柱,在做一個老項目時,目標(biāo)化合物的保留時間出現(xiàn)了漂移。同時對比舊柱子上目標(biāo)化合物的保留時間是在10min左右,而新柱子的目標(biāo)化合物的保留時間卻出現(xiàn)在了20min左右。

色譜條件:

色譜柱:月旭Topsil® Silica(4.6×250mm,5μm)。

流動相:乙酸乙酯/正己烷/甲醇/正丙醇=60/40/2/1;

檢測波長:256nm;

柱溫:30℃;

流速:1.0mL/min;

進(jìn)樣量:100μL。

? 售后排查

月旭實驗室對該項目進(jìn)行了驗證,發(fā)現(xiàn)的確在新柱子上目標(biāo)化合物的保留時間與客戶實驗室的做樣結(jié)果一致,在20min左右。

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繼而月旭實驗室對該方法流動相中的主要試劑乙酸乙酯和正己烷進(jìn)行了水半飽和的操作,使用水半飽和的流動相重復(fù)了實驗,樣品中目標(biāo)物的保留時間穩(wěn)定在了14min左右,與客戶實驗室用舊柱子做樣的保留時間基本一致。如下圖。

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通過月旭實驗室的排查驗證,流動相用水半飽和的方法,wan美解決了客戶在應(yīng)用正相色譜柱時出現(xiàn)目標(biāo)峰保留時間漂移的問題。

我們回訪客戶后,還有彩蛋哦~

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產(chǎn)品詳情

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