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反相離子對色譜法建立的注意事項(四)

更新時間:2022-04-21 點擊次數(shù):1087

大家看過之前的文章后,對反相離子對色譜法已經(jīng)有很清晰的認識了,今天小編為大家分享一個實際案例:



甲酰胺等6種物質的分離

微信截圖_20220421110335.png

初始條件

色譜柱:Ultimate® LP-C18(4.6×250mm,5μm)。

流動相:0.1%七氟丁酸溶液/乙腈;

檢測波長:210nm;

柱溫:30℃;

流速:1mL/min;

進樣量:10μL。

色譜圖

微信截圖_20220421110418.png

討論:

甲酰肼與4-氨基三氮唑合并,3-氨基三氮唑峰前有倒峰干擾,三氮唑峰型不好,甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離,增加離子對試劑濃度

流動相:0.3%七氟丁酸溶液/乙腈

色譜圖

微信截圖_20220421110446.png

討論:

增加離子對試劑濃度分離效果和基線都得到很好的改善,但約9分鐘處有倒峰,甲酰胺與二甲酰肼分離度未基線分離,增加離子對試劑中碳原子的數(shù)量。

流動相:10mmol/L KH2PO4(含1g/L辛烷磺酸鈉,pH1.6)/乙腈=85/15 

色譜圖

微信截圖_20220421110514.png

討論:

改用辛烷磺酸鈉以后無改善,改變離子對試劑種類

流動相:10mmol/L KH2PO4(含2g/L己烷磺酸鈉,pH1.5)/乙腈=90/10

色譜圖

微信截圖_20220421110546.png

討論:

第一,二個峰分離良好,其他物質需要改善,調(diào)整有機相的比例。

流動相:10mmol/L KH2PO4(含2g/L己烷磺酸鈉,pH1.5)/乙腈=95/5

色譜圖

微信截圖_20220421110614.png

測試結果:

保留及分離情況均良好,分離*,三氮唑峰形能滿足峰面積定量要求。

討論:

在分離甲酰胺等6個物質時,這幾個均為極性較大,反相色譜上保留弱,要達到六個成分的分離,首先需增加其保留,再根據(jù)情況,調(diào)整離子對試劑的量,pH值,有機相種類與濃度以達到分離,在實驗中選擇了耐受強酸條件的Ultimate® LP-C8(pH耐受范圍0.5-8)柱,通過調(diào)整離子對試劑的種類,濃度,有機相的比例,使得各物質得到良好的分離,滿足日常檢測需求。



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