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什么是固相萃???現(xiàn)在就帶你研究

更新時(shí)間:2021-04-22 點(diǎn)擊次數(shù):2802

樣品前處理是一項(xiàng)極其耗時(shí)、繁瑣且容易引入分析測定誤差的過程。樣品前處理方法對樣品的分析起著至關(guān)重要的作用,某種程度上來說,前處理決定了分析測試的結(jié)果,本文為大家呈現(xiàn)了一種常見的樣品前處理方法-固相萃取,它的一些原理與操作。


01 固相萃取吸附劑與目標(biāo)化合物之間的作用機(jī)理

 

固相萃取主要是通過固相吸附劑上的官能團(tuán)與目標(biāo)化合物的官能團(tuán)之間的作用力來保留/吸附的,這種作用力可分為非極性作用力、極性作用力、離子作用力、共價(jià)作用力等。

非極性作用力:對于鍵合硅膠及聚合物吸附劑而言,非極性作用力產(chǎn)生于固相萃取材料官能團(tuán)上的碳?xì)滏I與目標(biāo)化合物的碳?xì)滏I之間,常常被用于從樣品基質(zhì)中吸附分離具有非極性結(jié)構(gòu)的目標(biāo)化合物。如Welchrom® C18、Welchrom® C8、Welchrom® Phenyl等。

極性作用力:極性作用力發(fā)生在許多固相萃取材料極性表面與樣品中目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)之間,常見的具有極性作用力的吸附劑在色譜中一般都稱為正相色譜吸附劑。常見的極性固相萃取材料包括:硅膠、氧化鋁、弗洛里硅土及含有氰基、氨基、二醇基的鍵合硅膠。

離子作用力:離子作用力發(fā)生在帶相反電荷的目標(biāo)化合物與固相萃取吸附劑官能團(tuán)之間。如強(qiáng)陽離子交換劑 Welchrom® SCX、強(qiáng)陰離子交換劑Welchrom® SAX、弱陽離子交換劑Welchrom® WCX等。

共價(jià)作用力:共價(jià)作用力發(fā)生在共價(jià)填料與目標(biāo)化合物之間,共價(jià)鍵不易被打斷,但有的官能團(tuán)形成的共價(jià)鍵在改變?nèi)軇┉h(huán)境的條件下是可逆的,如苯硼酸基。


02 pH值對固相萃取的影響

 

pH值可以改變目標(biāo)物/吸附劑的離子化或質(zhì)子化程度。對于強(qiáng)陽/陰離子交換柱來講,因?yàn)槲絼┍旧硎?離子化的狀態(tài),目標(biāo)物必須*離子化才可以保證其被吸附劑*吸附保留。而目標(biāo)物的離子化程度則與pH值有關(guān)。如對于弱堿性化合物來講,其pH值必須小于其pKa值兩個(gè)單位才可以保證目標(biāo)物*離子化,而對于弱酸性化合物,其pH值必須大于其pKa值兩個(gè)單位才能保證其*離子化。對于弱陰/陽離子交換柱來講,必須要保證吸附劑*離子化才保證目標(biāo)物的*吸附,而溶液的pH值必須滿足一定的條件才能保證其*離子化。


03 固相萃取操作步驟

 

針對填料保留機(jī)理的不同(填料保留目標(biāo)化合物或保留雜質(zhì)),操作稍有不同。

目標(biāo)化合物保留模式

固相萃取操作一般有四步:

①活化----除去小柱內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。

②上樣----將樣品用一定的溶劑溶解,轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上。

③淋洗----Z大C度除去干擾物。

④洗脫----用小體積的溶劑將被測物質(zhì)洗脫下來并收集。(注意流速不要過快)

 

雜質(zhì)保留模式

固相萃取操作一般有三步:

①活化----除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。

②上樣----將樣品轉(zhuǎn)移入柱,此時(shí)大部分目標(biāo)化合物會隨樣品基液流出,雜質(zhì)被保留在柱上,故此步驟要開始收集。

③洗脫----用小體積的溶劑將組分淋洗下來并收集,合并收集液。(注意流速不要過快)


04 固相萃取柱(SPE)使用特點(diǎn)

 

樣品溶液體系性質(zhì)要與固相萃取要求相適應(yīng)。例如:在C18吸附待測化合物的模式中,樣品溶液體系中有機(jī)溶劑的比例不能太高;在C18吸附樣品基質(zhì)的模式中,樣品溶液體系中有機(jī)溶劑的比例不能太低。

要注意填料承載能力,防止上樣超載導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

過柱流速要合適,不能過快或過慢,特別是樣品溶液上柱和洗脫兩個(gè)環(huán)節(jié)的過柱速度要控制。一般過柱流速為1~3mL/min。

對于使用硅膠基質(zhì)的SPE小柱在樣品溶液上柱前不能干涸。如果干涸了應(yīng)該重新對小柱進(jìn)行活化。

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