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奶及奶制品中雌三醇?xì)埩袅康臏y定

更新時間:2020-12-29 點擊次數(shù):1343

 

 1 適用范圍
 
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了奶及奶制品中雌三醇?xì)埩袅康臏y定方法(本實驗樣品為牛奶)。  

參考標(biāo)準(zhǔn):《GB 29698-2013 食品安q國家標(biāo)準(zhǔn) 奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇多殘留的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》


2 提取步驟

準(zhǔn)確稱取10g試樣(j確至0.01g)于50 mL離心管中,加入5mL乙腈、15mL乙酸乙酯,渦旋3min,以8000r/min離心5min,吸取上清液于50mL雞心瓶中,殘渣重復(fù)上述步驟重復(fù)提取一次,合并提取液。于40℃下濃縮至近干,用1mol/L NaOH溶液6mL分三次溶解,轉(zhuǎn)至另一50mL離心管中,加20mL正己烷渦旋振蕩1min,以8000r/min離心3min,收集下層提取液,用5mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至5.0-5.2,備用。


3 凈化步驟

SPE柱:月旭Welchrom  C18小柱,規(guī)格:500mg/6mL。

活化平衡:5mL甲醇,5mL水;

上樣:將備用液全部上樣,棄去;

淋洗:5mL水,棄去并壓干;

洗脫:5mL甲醇,收集并壓干。

收集洗脫液于40℃氮吹至干,用5mL 95%正己烷-乙酸乙酯溶液溶解殘余物,待凈化。

SPE柱:月旭Welchrom  Silica小柱,規(guī)格:500mg/6mL。

活化平衡:5mL正己烷;

上樣:將待凈化液全部上樣,棄去;

淋洗:5mL正己烷,棄去并壓干;

洗脫:5mL 70%正己烷-乙酸乙酯溶液,收集于具塞玻璃試管中并壓干。


4 衍生化

將上述洗脫液于40℃氮吹至干,加入30μL七氟丁酸酐、70μL丙酮蓋緊蓋子,渦旋混合30s,于30℃恒溫箱中衍生30min,氮吹至干,準(zhǔn)確加入1mL正己烷,渦旋混合10s,溶解殘余物,供GC-MS分析。


5 色譜條件

氣相色譜條件

色譜柱:WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm;

進樣口溫度:250℃;

升溫程序:120℃,保持2min,以15℃/min升溫至250℃,再以5℃/min升溫至300℃,保持5min;

載氣:高純氦氣(純度>99.999%);

進樣方式:不分流進樣;

恒流模式:1.0mL/min;

進樣量:1μL。

質(zhì)譜條件

電離方式:電子轟擊電離源(EI);

電離能量:70eV;

傳輸線溫度:280℃;

離子源溫度:230℃;

四極桿溫度:150℃;

監(jiān)測方式:449.1/409.1/356.1;

溶劑延遲:5min。


6 色譜圖或者加標(biāo)回收率結(jié)果
 
 

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