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色譜柱的“長生不老”xiulian之術(shù)—上篇

更新時間:2020-08-12 點擊次數(shù):1258

 

壽命

色譜柱壽命不理想的問題一直困擾著眾多實驗室的小伙伴們,針對各品牌色譜柱的壽命表現(xiàn)均低于它們的普遍壽命的情況,不少小伙伴紛紛表示其玻璃心不堪色譜柱年輕即逝的打擊。對此,月旭科技為您仔細(xì)研究了色譜柱的“長生不老”之術(shù),解決色譜柱壽命不理想的問題,話不多說,快跟隨小編腳步一起往下看吧!

 

月旭科技將為您提供以下解決思路

 

01 di一步

自查:

1、是否使用同填料保護(hù)柱(相同品牌);

2、流動相從配置到棄用在 12 小時以內(nèi);

3、流動相瓶子嚴(yán)格清洗干燥,密封;

4、濾頭濾膜材質(zhì)和品質(zhì)是否選擇錯,注意查看是否使用后有溶解現(xiàn)象;

5、使用廠家推薦的沖洗方式?jīng)_洗色譜柱。

 

02 第二步

以上自查項目改善后均不能解決,則采取第二步:廠家溝通,建議寄回廠家進(jìn)行色譜柱“解剖”,月旭科技擁有多年專業(yè)“解剖”各種問題色譜柱的經(jīng)驗,為您總結(jié)出可能出現(xiàn)的原因如下:

 

原因一:色譜柱污染

 

可能出現(xiàn)的原因

1、樣品組分吸附在色譜柱的前端

a、可能是由于樣品在流動相中的溶解度低而沉淀出來的;

b、樣品中有強(qiáng)保留物質(zhì)(與鍵合相極性相似的物質(zhì));

c、樣品或者流動相中與填料表面發(fā)生微弱的不可預(yù)知的化學(xué)反應(yīng);

d、樣品溶劑本身的pH值在色譜柱的耐受臨界值附近,而且進(jìn)樣體積較大(內(nèi)徑4.6mm,上樣體積在 50μl 以上)。

 

通常這樣的情況伴隨柱壓升高;或者柱壓正常,一個色譜圖中出現(xiàn)有些峰形異常,有些峰形正常的情況。

 

解決方法

a、 盡量從根源上解決問題,選擇合適的樣品前處理技術(shù),去除掉強(qiáng)保留物質(zhì),獲得更加“干凈”更加成分單一的樣品;

b、 使用保護(hù)柱,保護(hù)柱的選擇盡量與分析柱同等填料,同等鍵合方法的保護(hù)柱,如果使用不同品牌填料、不同裝填工藝的保護(hù)柱,在分離能力和保護(hù)方面可能得不到ZH的效果,也不要使用更大粒徑的保護(hù)柱,更大粒徑或者裝填較差的保護(hù)柱會因為它的峰展寬作用而導(dǎo)致分離能力下降。

 

2、流動相“臟”了

流動相在色譜柱中的使用量比樣品要大得多,不停的沖刷色譜柱,如果流動相變質(zhì)或者有其他的污染物,那對色譜柱的污染會比樣品更大,色譜柱對流動相反而是一種凈化,而且在運行梯度時,還會出現(xiàn)鬼峰。

 

解決方法

a、流動相配置后盡快使用,多不超過 12 小時;

b、有機(jī)相和鹽相混合的流動相,更容易導(dǎo)致鹽的析出,盡量使用在線混合,且在運行梯度時變化速率不宜太快,避免鹽析出;

c、用專業(yè)的經(jīng)過鈍化處理過的溶劑瓶裝流動相,切忌不能使用塑料瓶,做好密封,在更換流動相的時候同時更換試劑瓶;

d、水在接觸空氣或者離開制水設(shè)備以后會出現(xiàn)變質(zhì),現(xiàn)用現(xiàn)制,打開后盡快使用。

 

原因二 固定相損壞

 

 

 

由色譜條件的多方面作用而導(dǎo)致的固定相損壞,是目前的色譜技術(shù)不能解決的一個問題。一般情況下小基團(tuán)鍵合相更容易被水解而脫落,加快了鍵合相的脫落。硅膠裸露以后暴露在流動相中,增加了鹽等對硅膠骨架的攻擊,導(dǎo)致骨架變薄,機(jī)械強(qiáng)度降低,表現(xiàn)為柱頭塌陷。

 

可能出現(xiàn)的原因

a、流動相中的鹽,尤其是磷酸類的緩沖鹽,對硅膠的攻擊是較強(qiáng)的;

b、高柱溫,加快鹽運動的速率;

c、高氧,流動相中未排除的氧,會加快硅膠內(nèi)部鍵的斷裂;

d、高pH(>8),OH 根離子攻擊硅膠內(nèi)部的 Si-O-Si 鍵,導(dǎo)致硅膠直接破碎;

e、低 pH(<2),H 根離子攻擊硅膠表面的 Si-C 鍵,鍵合相脫落以后,硅膠裸露出來;

f、高水,也是引起鍵合相水解硅膠裸露的重要誘因。

 

解決方法

a、使用鹽的時候,柱溫 ≤30℃;

b、鹽的濃度使用在 50mmol 以下;

c、使用在線脫氣機(jī)或者超聲脫氣(10 分鐘,時間太久會發(fā)熱導(dǎo)致流動相成分改變);

d、除了特殊標(biāo)注,色譜柱的使用 pH 值在 2-8 之間,如果樣品溶解的 pH 較苛刻,請使用保護(hù)柱來抵御 pH 所帶來的損傷,并及時更換;

e、不要把未標(biāo)注能耐受純水的色譜柱使用在水相大于 95% 的流動相條件下。

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