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His鎳柱標簽蛋白純化,就是這么簡單

更新時間:2019-08-12 點擊次數:7729

簡 介

 

1975年,Porath等人提出了一種新的純化方法-固定化金屬鰲合層析,利用金屬離子(Ni2+,Cu2+等)與氨基酸表面的殘基(如組氨酸的咪唑基)的配位鰲合作用,來純化與金屬離子有親和作用的蛋白質。

組氨酸標簽由于分子量小,幾乎不干擾靶蛋白的功能、活性和結構而被廣泛的使用。固定的金屬離子親和層析是純化組氨酸標簽蛋白的常用方法。

 

組氨酸標簽蛋白的純化工具

月旭Ni親和填料Ni Tanrose 6FF(NTA)

Ni Tanrose 6FF(NTA)親和介質是將金屬離子Ni2+鰲合在以氨三乙酸為配基的6%高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠上形成的親和層析介質。月旭科技研發(fā)的Ni Tanrose 6FF(NTA)不僅純化純度較高,通過控制合理的Ni離子密度,結合載量可達到~40mgHis標簽蛋白/ml介質,可以用于各種表達來源(如大腸桿菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物細胞)的組氨酸標簽(6xHis-tagged)蛋白的純化。NTA含有四個螯合區(qū),較一般的三齒螯合劑能更好的結合Ni2+。6xHis可與Ni2+螯合,從而使His標簽蛋白結合在Ni Tanrose 6FF(NTA)純化介質上,未結合的蛋白被洗滌下去,結合在介質上的蛋白經過一定濃度的咪唑或低pH緩沖液被溫和的洗脫下來,從而得到高純度的目標蛋白。具有載量高、選擇性好、易于再生、成本低等優(yōu)點。有了它,再也不用擔心完不成純化任務了。

PreCot Ni 6FF(NTA)是Ni Tanrose 6FF(NTA)的1ml和5ml預裝柱,用來純化6xHis-tagged蛋白,可以使用注射器、蠕動泵,或者液相層析系統(tǒng)(例如AKTA或FPLC)。

 

Ni Tanrose 6FF(NTA)應用案例

預裝柱:PreCot Ni 6FF(NTA) 5ml

樣品:含有His標簽蛋白(大腸桿菌表達)

平衡液A:50mM Tris-HCl,0.5M NaCl,20mM咪唑pH8.0

洗脫液B:50mM Tris-HCl,0.5M NaCl,0.5M 咪唑,pH8.0

流速:平衡、洗脫-1.0ml/min上樣-0.5ml/min

 

PreCot Ni 6FF(NTA)純化His標簽蛋白的純化色譜圖

 

             1:原液

              2:流穿

              3:洗脫(100%B)

              4:原液

              5:流穿

              6:洗脫(100%B)

 

備注:1-3(樣品和平衡液中不含咪唑);4-6(樣品和平衡液中含20mM咪唑)

 

由于宿主蛋白中也存在組氨酸和/或半胱氨酸氨基酸殘基,其他的非特異性蛋白與靶蛋白一起與金屬離子親和層析填料結合,造成純化樣品純度不高。提高樣品中的咪唑濃度,組氨酸標簽蛋白通過Ni Tanrose 6FF(NTA),可以一步純化得到85%以上純度的純化樣品。

 

    

 

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