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凝膠制備液相色譜儀的調(diào)整原則和進(jìn)樣方式

更新時間:2018-07-11 點(diǎn)擊次數(shù):1925
凝膠制備液相色譜儀分析方法開發(fā)中流動相的調(diào)整原則:
1、由強(qiáng)到弱:一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn),可很快得到分離結(jié)果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
2、三倍規(guī)則:每減少10%的有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加約3倍,此為三倍規(guī)則。調(diào)整時注意觀察各個峰的分離情況。
3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):當(dāng)分離達(dá)到一定程度時,應(yīng)將有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調(diào)整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。

凝膠制備液相色譜儀的進(jìn)樣方式
1.隔膜進(jìn)樣。用微量注射器將樣品注進(jìn)專門設(shè)計(jì)的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi),可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,死體積幾乎即是零,可以獲得的柱效,且價格便宜,操縱方便。但不能在高壓下使用;此外隔膜輕易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng),使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1~2%;加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到,常規(guī)分析使用受到限制。  
2.停流進(jìn)樣??杀苊庠诟邏合逻M(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點(diǎn)是保存時間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中,效果較好。  
3.閥進(jìn)樣。一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥,其關(guān)鍵部件由圓形密封墊和固定底座組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在,柱效率低于隔膜進(jìn)樣,但耐高壓,進(jìn)樣量正確,重復(fù)性好,操縱方便。  
4.自動進(jìn)樣。用于大量樣品的常規(guī)分析。  
早期使用隔膜和停流進(jìn)樣器,裝在凝膠制備液相色譜儀進(jìn)口處?,F(xiàn)在大都使用六通進(jìn)樣閥或自動進(jìn)樣器。進(jìn)樣裝置要求:密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。

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